Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的流程中逐渐扩展

从第一次显现去甲自身突变到显现1改进型癌症针灸呕吐的重大突破不下在儿童末期就有很好的详细描述，多个去甲自身突变特征性的儿童里有70%在血清反转后10短期内罹患癌症，而随访15年的儿童这一%-减低到84%。相对于之下，占针灸1改进型癌症一半以上的改进型1改进型癌症的得病机制还并未得到应有的研究成果。

日益多的人开始应用于分期系统来定义1改进型癌症的重大突破：个纤在显现多种去甲自身突变时转至第1下一阶段，显现血糖异常时转至第2下一阶段，显现呕吐时转至第3下一阶段。一些多发去甲自身突变特征性的个纤，在1期和2期，重大突破较很慢，并发展为得病的1改进型癌症。我们前详细描述了都由在首次检查到多种去甲自身突变试样后至少10年无癌症的极很慢重大突破者，这一组病患者次数少，但相似性非常清楚。随后，我们发现去甲自身肝细胞特异性CD8+T巨噬细胞中间体在重大突破缓很慢的病患者里必需不依赖于，但在近期得病和长年依赖于的癌症病患者里很难以检查到。这可能论据论据，与重大突破病患者相对于，这些病患者诱发中间体的抑制增强。

以前研究成果论据论据，尽管抑制性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但癌症病患者依赖于一些系统缺陷，其里包括对IL-2的中间体能力也下降。此外，癌症病患者里的现像CD4+T巨噬细胞可能对抑制更具抵抗性，表现为现像T巨噬细胞的可抑制减弱，自然产生的Treg和纤外产生的诱导Treg，以及肝细胞境遇的CD4+T巨噬细胞里IL-2中间体减弱。本研究成果的目的是详细描述了CD4+抑制性T巨噬细胞(Treg)在一小群极缓很慢重大突破者里的相似性，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以许多人为基础的斜向研究成果，在21岁以下发病的病患者亲属里检查1改进型癌症的脆弱因素。我们前详细描述了长年缓很慢重大突破者的相似性，他们持续保持多重去甲自身突变特征性超过10年，但并未显现癌症的针灸呕吐，很慢性或非透过性诱发。随后，10名继续持续保持无癌症并愿意包括大量血液试样的缓很慢重大突破者纳入T和B巨噬细胞系统归纳。在现阶段的研究成果里，8名很慢重大突破者(SP一组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的去甲自身突变特征性。所有的参与者都受制于1改进型癌症重大突破的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身突变对某些肝细胞的特征性中间体，然而，一名病患者已经受制于2期至少6年，但并未显现针灸呕吐，一名病患者被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里对该小分子透过了单独评核。分立外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多给定流式巨噬细胞精和T巨噬细胞可抑制检验评核小分子里Treg的频不下、变异和系统。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无监督聚类归纳，评核Treg变异。

结果：与保健小分子相对于，来自很慢重大突破纤的遗忘CD4+T巨噬细胞的监督聚类看出，激活的遗忘CD4+ Treg频不下减低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读减低有关。一名HbA1c急剧下降的病患者与重大突破缓很慢者和匹配的对照一组相对于，Treg谱大同小异。系统已经有，与保健小分子相对于，来自缓很慢重大突破纤的Treg介导的CD4+现像T巨噬细胞可抑制明显损害。表现为对现像CD4+T巨噬细胞CD25和CD134解读的可抑制减低。

所示1 深入的变异归纳看出，CD4+Treg亚改进型在很慢重大突破队列里减低。由FlowSOM生成的Treg室，汇聚在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示出物解读鉴定出10个元簇:遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)应用于9个不同Treg标示出生成的10个元簇的MST。每个路由器代表人一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器一组周围上色。每个路由器里的碗所示说明单个标示出的解读级别。(b)每个元聚类的热所示，以看出结构上标示出解读。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)生成所示，以及FlowSOM定位的每个元簇的孔洞。(e-l)相对于总质量为每个metacluster筒支线所示(总质量> 0.05%)确定为HD和SP一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T巨噬细胞(l)。黄色格子代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配下标秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 应用于CITRUS的预测模改进型证实，Treg频不下的减低是重大突破缓很慢的红色。分级门控(a - f)和柑橘归纳(g-k)来得SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的代表人性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR解读透过分立，模拟FlowSOM族群。(b) HD(黑点)和SP(星点)一组以及小分子SP 606(黄色)里CD25+ cd127的频不下汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的筒支线所示;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度纹理，箭头突出的簇被定位为SP和HD队列彼此之间的不同。(j)筒支线所示看出了在SP(星点)和HD(灰点)一组里，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对于总质量(%-)。(k)直方所示看出每个簇的变异(黑色)和Treg标示出相对于解读与历史背景解读(红色);上列，存储器Treg_3;上面即刻，存储器Treg_4。历史背景与所有其他簇里标示出的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配下标秩检验

所示3 与保健献血者相对于，重大突破缓很慢者遗忘treg的GITR减低。每个遗忘CD4+T巨噬细胞元簇(遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个解读标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热所示(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR解读串联，看出直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon匹配下标秩和检验，p< 0.07(黄色)所有小分子包括，p< 0.05(红色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR解读，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(黄色)串联，看出直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配下标秩检验

所示4 来自缓很慢重大突破的CD4+ treg巨噬细胞控制现像CD4+T巨噬细胞的能力也下降。SP一组用红色的支线和格子说明，HD一组用黄色的支线和格子说明，黄色的支线/格子说明小分子sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(应答者)被标示出为CFSE, Treg按检视的%-氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠转化巨噬细胞，培养出来3当晚透过流式巨噬细胞精检查。(a-d)与CD4+应答者相对于应的treg培养出来(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培养出来。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE可抑制百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制百分比。应用于特征性对照(激活的响应巨噬细胞不含treg)推算可抑制百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

所示5 现像CD4+T巨噬细胞对缓很慢重大突破的T巨噬细胞转化的可抑制更敏感。SP一组用红色的支线和格子说明，HD一组用黄色的支线和格子说明，黄色的支线/格子说明小分子sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标示出，treg按检视的%-氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠转化巨噬细胞，培养出来3当晚透过流式巨噬细胞精(CD25反染)和巨噬细胞因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培养出来。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE可抑制百分不下(b)。(c,d) CD25可抑制百分不下(c)和CD134可抑制百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大出来里的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

论据：我们论据的论据是，来自缓很慢重大突破子的转化遗忘CD4+Treg在GITR解读里得到了扩展和丰富，合理化了必要性研究成果Treg在1改进型癌症几率个纤里的异质性的重要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28