Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次出现人微内免疫性球蛋白到出现1HG癌症诊断征状的的发展部将在学童时期就有格外好的阐述，多个人微内免疫性球蛋白中性的学童里面有70%在血清转换后10年内中风癌症，而随访15年的学童这一%-减低到84%。相比较之下，占诊断1HG癌症一半以上的HG1HG癌症的得病机制还很难取得更好的研究者。

越来越多的人开始适用分期系统来定义1HG癌症的的发展：个微在出现多种人微内免疫性球蛋白时进入第1前期，出现皮质醇异常时进入第2前期，出现征状时进入第3前期。一些多发人微内免疫性球蛋白中性的个微，在1期和2期，的发展较格外慢，并发展为得病的1HG癌症。我们在此之后阐述了一四组在首次检测到多种人微内免疫性球蛋白结果显示后有数10年无癌症的极格外慢的发展者，这四组病征伤亡人数少，但特性十分指明。随后，我们发现人微内自身肝肝细胞特异性CD8+T肝细胞自由基在的发展很格外慢的病征里面基本不存在，但在近期得病和经常性存在的癌症病征里面很格外易检测到。这或许说明了，与的发展病征相比较，这些病征免疫性自由基的平衡加强。

早期研究者说明了，尽管平衡性T肝细胞(Treg)生产量出现异常，但癌症病征存在一些基本功能局限性，其里面包括对IL-2的自由基能力减缓。此外，癌症病征里面的不稳定性CD4+T肝细胞或许对平衡格外具抵抗性，表现为不稳定性T肝细胞的抑制作用减弱，自然激发的Treg和微外激发的游离Treg，以及肝肝细胞境遇的CD4+T肝细胞里面IL-2自由基减弱。本研究者的目的是阐述了CD4+平衡性T肝细胞(Treg)在一小群极很格外慢的发展者里面的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以成年人为基础的垂直研究者，在21岁表列确诊的病征亲属里面定期检查1HG癌症的小心因素。我们在此之后阐述了经常性很格外慢的发展者的特性，他们保持一致多重人微内免疫性球蛋白中性超过10年，但很难出现癌症的诊断征状，格外慢性或非同步进行性免疫性。随后，10名在此期间保持一致无癌症并愿意备有大量体液结果显示的很格外慢的发展者确立T和B肝细胞基本功能分析。在目前的研究者里面，8名格外慢的发展者(SP四组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人微内免疫性球蛋白中性。所有的与会者都始终保持1HG癌症的发展的1期，尽管一些人随后失去了人微内免疫性球蛋白对某些肝肝细胞的中性自由基，然而，一名病征已经始终保持2期有数6年，但很难出现诊断征状，一名病征被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验结果显示时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该供微同步进行了单独审核。分离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞奥义和T肝细胞抑制作用试验车审核供微里面Treg的频部将、性状和基本功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、相关联和紧接著)同步进行无监督聚类分析，审核Treg性状。

结果：与卫生供微相比较，来自格外慢的发展微的潜意识CD4+T肝细胞的监督聚类说明了，转录的潜意识CD4+ Treg频部将减低，与持续性游离的TNFR无关蛋白(GITR)暗示减低有关。一名HbA1c升高的病征与的发展很格外慢者和比如说的对照四组相比较，Treg小曲有所不尽相同。基本功能分析说明了，与卫生供微相比较，来自很格外慢的发展微的Treg游离的CD4+不稳定性T肝细胞抑制作用明显受到影响。表现为对不稳定性CD4+T肝细胞CD25和CD134暗示的抑制作用减低。

绘出1 透彻的性状分析说明了，CD4+Treg亚HG在格外慢的发展队列里面减低。由FlowSOM作用于的Treg室，挤满在来自所有供微的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标识物暗示鉴定出10个元簇:潜意识T肝细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个不尽相同Treg标识作用于的10个元簇的MST。每个端口亦然一个坦克部队(100个坦克部队)，格外大的元坦克部队(10个元坦克部队)在端口四组附近上色。每个端口里面的点心绘出对此单个标识的暗示级别。(b)每个元聚类的热绘出，以说明了整微标识暗示。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)作用于绘出，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说生产量级为每个metacluster木箱支线绘出(生产量级> 0.05%)相符为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T肝细胞(l)。粉红色格子亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 适用CITRUS的预测模HG证实，Treg频部将的减低是的发展很格外慢的标志。分级奈斯(a - f)和甜菜分析(g-k)比较SP与会者和比如说的HD与会者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的亦然性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示同步进行分离，模拟FlowSOM人群。(b) HD(横纹)和SP(蓝点)四组以及供微SP 606(粉红色)里面CD25+ cd127的频部将简介绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯邻域的木箱支线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度上色，对角突出的簇被鉴别为SP和HD队列之间的不尽相同。(j)木箱支线绘出说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对来说生产量级(%-)。(k)直方绘出说明了每个簇的性状(粉红色)和Treg标识相对来说暗示与故事情节暗示(粉红色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。故事情节与所有其他簇里面标识的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

绘出3 与卫生献血者相比较，的发展很格外慢者潜意识treg的GITR减低。每个潜意识CD4+T肝细胞元簇(潜意识T肝细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个暗示标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR暗示串联，说明了直方绘出(c)和简介绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(粉红色)所有供微包括，p< 0.05(粉红色)供微SP 606和比如说的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR暗示，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)串联，说明了直方绘出(e)和简介绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

绘出4 来自很格外慢的发展的CD4+ treg肝细胞控制不稳定性CD4+T肝细胞的能力减缓。SP四组用粉红色的支线和格子对此，HD四组用黑色的支线和格子对此，粉红色的支线/格子对此供微sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标识为CFSE, Treg按观察的%-氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，指导3天内同步进行流式肝细胞奥义检测。(a-d)与CD4+转发者相对来说应的treg指导(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者指导。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE抑制作用百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百分比。适用中性对照(转录的拥护肝细胞包含treg)计算抑制作用百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 不稳定性CD4+T肝细胞对很格外慢的发展的T肝细胞重置的抑制作用格外敏感性。SP四组用粉红色的支线和格子对此，HD四组用黑色的支线和格子对此，粉红色的支线/格子对此供微sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标识，treg按观察的%-氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，指导3天内同步进行流式肝细胞奥义(CD25反染)和肝细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同指导。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE抑制作用百分部将(b)。(c,d) CD25抑制作用百分部将(c)和CD134抑制作用百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导里面的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自很格外慢的发展子的重置潜意识CD4+Treg在GITR暗示里面取得了扩展和丰富，强调了进一步研究者Treg在1HG癌症风险个微里面的异质性的重要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28